|
|
|
|
|
Adaptado de Shimanuki, Hachiro, and David A. Knox. 1990. Diagnosis of Honey Bee Diseases. U.S. Department of Agriculture, Agriculture Handbook AH-690:
La mayoría de las enfermedades de la abeja pueden ser diagnosticadas observando los microorganismos asociados con un microscopio ligero. Las técnicas siguientes se utilizan comúnmente para preparar las diapositivas del microscopio para la examinación:
Gota Colgante
La gota colgante modificada (Michael 1957) puede ser muy útil para distinguir las enfermedades de la cría. El residuo de una célula (escama or costra) sospechasa primero se mezcla con agua. Entonces una gota de esta suspensión (borrón de transferencia) se pone en un cristal de la cubierta. La suspensión usada debe siempre ser diluída y solamente levemente turbia.
El borrón de transferencia se seca y está fijado bajo una lámpara del calor, o el borrón de transferencia puede ser aire secado y el calor fijado pasándolo con a bunsen rápidamente la llama de la hornilla dos o tres veces. El borrón de transferencia fijo se mancha con el carbol fuchsin1 (Solución A: 0,3 fuchsin básicos de g (contenido) del tinte 90%, alcohol etílico de 10 mL (95%); solución B: fenol de 5 g, agua destilada 95 mL. Soluciones A y B de la mezcla. ) o una mancha conveniente de la espora por 10 segundos. Bastante mancha se debe colocar en el cristal de la cubierta para cubrir el borrón de transferencia entero. Exceso de la mancha entonces se lava apagado con agua.
Mientras que el borrón de transferencia sigue siendo mojado, el cristal de la cubierta se invierte con la cara del borrón de transferencia abajo y se coloca sobre una diapositiva estándar del microscopio cubierta previamente con un muy de capa delgada del aceite de la inmersión. La diapositiva es seca suavemente borrado y examinado con un microscopio usando el objetivo de la inmersión del aceite.
Resultados: Los organismos que no son calor fijado se cogen en las áreas donde los bolsillos de agua han formado en el aceite, y los organismos exhiben generalmente el movimiento browniano (Brownian movement). Esto es una prueba excelente para el loque americano pues las esporas exhiben típicamente el movimiento browniano, sin embargo, solamente puede no ser mancha simple de diagnóstico que este método confía solamente en distinguir las bacterias por morfología.
Simple Stain
Ponga una gota de la suspensión directamente en una diapositiva del microscopio. Caliente el arreglo y manche el borrón de transferencia según lo descrito en la sección anterior. El fuchsin de Carbol, el azul de metileno, y el safranin son ejemplos de las manchas que pueden ser utilizadas. Seque o borre suavemente el borrón de transferencia manchado al aire. Ponga una gota del aceite de la inmersión directamente en el borrón de transferencia.
Cristal de la cubierta no es necesario. Examine la diapositiva, usando el objetivo de la inmersión del aceite. Resultados: Los organismos se manchan uniformemente y se distinguen fácilmente.
Gram Stain
La mancha del gramo (Gram stain) es un método microbiológico estándar que se puede substituir para la mancha simple. Abreviadamente, el procedimiento es como sigue: Un borrón de transferencia fijo se mancha con la violeta cristalina, sumergida en la solución del yodo, decolorada en alcól etílico, y luego manchado con el safranin. Resultados: Los organismos gram-positive son azules; Los organismos gram-negative son rojos.
Wet Mount
El montaje mojado es especialmente útil para examinar hongos o protozoos. Macere una porción de la muestra en agua. Ponga una gota de la suspensión en una diapositiva del microscopio, y caiga cuidadosamente el cristal de la cubierta en él para reducir al mínimo los bolsillos de aire. No se requiere ninguna mancha. El montaje mojado se examina generalmente con los objetivos secos de un microscopio. Resultados: Los organismos refractan la luz y son por lo tanto visibles en la diapositiva. Fase-ponga en contraste el microscopio puede ser provechoso, especialmente si un objetivo de la inmersión del aceite es organismos de required.
Referencias:
Michael, A.S. 1957. Droplet method for observation of living unstained bacteria. Journal of Bacteriology 74:831-832.