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Adaptado de Shimanuki, Hachiro, and David A. Knox. 1990. Diagnosis of Honey Bee Diseases. U.S. Department of Agriculture, Agriculture Handbook AH-690:
Prueba De la Leche De Holst: La prueba de la leche de Holst (Holst 1946) es simple y basada en el hecho de que un alto nivel de enzimas proteolíticas es producido por las larvas de esporulación de Paenibacillus larvae larvae. La prueba es conducida suspendiendo una escama (costra) sospechada o un borrón de transferencia de una larva enferma en un tubo que contiene 3-4 mL de la leche desnatada pulverizada el 1% en agua. El tubo entonces se incuba en 37 grados C. Cuando P. larvae larvae es presente, la suspensión borra (se pone claro) en 10-20 minutos. Debe ser observado que esta prueba no es siempre confiable y una indicación solamente.
Reducción Del Nitrato: El Paenibacillus larvae larvae reduce el nitrato al nitrito (Lochhead 1937). La prueba de la reducción del nitrato se puede realizar en un media tal como BHIT, que contiene el nitrato del potasio (1-2 mg/l del media). Después de que haya ocurrido el crecimiento, la adición de una gota del reactivo sulfanilic del ácido-alfa-naftol produce un color rojo si el nitrato se ha reducido al nitrito. La diagnosis no se debe basar en esta prueba solamente sino en esta prueba junto con síntomas gruesos larvales, morfología bacteriana, y características del crecimiento de la colonia bacteriana.
Producción Del Catalase: Una gota del peróxido de hidrógeno del 3% se pone en una cultura activamente cada vez mayor en un media sólido. La mayoría de las bacterias aerobias se descompone el peróxido hasta agua y oxígeno y produce una espuma, pero las larvas con Paenibacillus larvae larvae son casi siempre negativas para esta reacción (Haynes 1972).
Anticuerpo Fluorescente: La técnica del anticuerpo fluorescente requiere la preparación de los anticuerpos específicos manchados con un tinte fluorescente. Los conejos se inyectan con las culturas puras de Paenibacillus larvae larvae, y el antisuero activo se recoge y se mancha con un tinte fluorescente. Este antisuero fluorescente se mezcla con un borrón de transferencia bacteriano en una diapositiva y se permite reaccionar. Exceso del antisuero se lava de la diapositiva, y la diapositiva entonces se examina con un microscopio de la fluorescencia. Paenibacillus larvae larvae aparecen como cuerpos brillantemente en un fondo oscuro (Toschkov et al. 1970, Zhavnenko 1971, Otte 1973, Peng y Peng 1979).
Referencias:
Holst, E.C. 1946. A single field test for American foulbrood. American Bee Journal 86:14, 34.
Lochhead, A.G. 1937. The nitrate reduction test and its significance in the detection of Bacillus larvae. Canadian Journal of Research 15:79-86.
Haynes, W.C. 1972. The catalase test: An aid in the identification of Bacillus larvae. American Bee Journal 112:130-131.
Otte, E. 1973. A contribution of the laboratory diagnosis of American foulbrood of the honey bee with a particular reference to the immunofluorescence method. Apidologie 4:331-339.
Peng, Y-S., and K-Y. Peng. 1979. A study on the possible utilization of immunodiffusion and immunofluorescence techniques as the diagnostic for American foulbrood of honeybees (Apis mellifera). Journal of Invertebrate Pathology 33:284-289.
Toschkov, A., T. Vallerianov, and A. Tomov. 1970. Die Immunofluoreszenzmethode und die Schnelle und Spezifische Diagnotik der Amerikanischen Faulbrut bei der Bienenbrut. Bulletin Apicole de Documentation et d'Information 13:13-18.
Zhavnenko, V.M. 1971. Indirect method of immunofluorescence in the diagnosis of foulbrood (American and European) (in Russian). Veterinariya (Kiev) 8:109-111.